PCR en tiempo real

 

FUNDAMENTO DE REACCION DE CADENA POLIMERASA (PCR) Y DE PCR EN TIEMPO REAL

Estudio de los genes. Primeros descubrimientos de Watson y Critk, descifraron la estructura del ADN. PCR por Cary Mullis. PCR copiar millones de veces, por la enzima ADN polimerasa

·        Detectar y cuantificar los ácidos nucleicos es PCR en tiempo real, técnica cuantitativa

Áreas

·        Ciencias biológicas,

·        Salud

·        Experimentación génica

·        Gentrificación

·        Detección de patógenos

·        Análisis de mutaciones

La PCR convencional es de punto final

La reacción aprovecha la actividad de la enzima de ADN polimerasa con capacidad de sintetizar, naturalmente el ADN en células

·        Sustrato ADN genómico, se habla de PCR

·        Sustrato ADN complementario ADNc, proveniente de ARNm, se conoce como, RT-PCR(reverse Transcription – PCR. Se logra por la transcripción reversa , controlada por la transcriptasa reversa, que convierte ARNm en ADNc, COPIADO POR UN RETROVIRUS

Elementos de la reacción en el TERMOCICLADOR

·        El templado o molde (ADN o ADNc),

·        la enzima,

·        los oligonucleótidos o primers,

·        los desoxirribonucleótidos trifosfatados (dNTPs: adenina, timina, citosina y guanina),

·        el ión magnesio (Mg +),

·        una solución amortiguadora o buffer

·        H2O.

Los productos de PCR son amplicones, son analizados en el gel de agarosa

ADN formado por 3 componentes: doble hélice, carga eléctrica negativa

 

 

·        un azúcar (desoxirribosa),

·        un grupo fosfato

·        una base nitrogenada (adenina, timina, guanina o citosina) que es complementaria con la base de otra cadena