Pruebas bioquímicas: (sistemas API®, Microscan®, Vytec® , zimogramas y auxonogramas) Los perfi les bioquímicos ante diferentes sustratos son las pruebas rutinarias más utilizadas para identifi cación de especies de levaduras; permiten obtener un patrón casi específi co para la identidad de las mismas, aunque el estándar de oro siguen siendo los estudios de biología molecular (secuenciación y PCR), mas pueden ser inoperantes por su alto costo e inaccesibilidad de muchos laboratorios.
Pruebas de susceptibilidad Microdilución en caldo (NCLSI) El método de prueba de susceptibilidad in vitro para especies de mohos y levaduras utilizando diluciones seriadas en caldo RPMI y RPMI-1640 (del inglés Roswell Park Memorial Institute Medium) o medio de alto contenido de fosfatos y lectura con lector para placas de ELISA, permite observar sensibilidad y resistencia a diferentes concentraciones; es altamente sensible, aunque requiere de un equipo, reactivos y un área específi cos de trabajo, por lo cual sólo se puede realizar en laboratorios especializados; se considera el método de referencia y estándar de oro para susceptibilidades (véase capítulo 38, Pruebas de susceptibilidad antifúngica).
Tiras LE Son tiras de acetato de celulosa impregnadas con antimicóticos a concentraciones decrecientes; permiten observar la formación de halos de inhibición al colocarlas sobre placas de agar sembradas masivamente; el halo adquiere forma de ojiva y el punto en el cual se puede apreciar la CMI es aquel en donde la base de la ojiva toca la cinta. Es un método muy sencillo y fácil de realizar en cualquier laboratorio; sin embargo, en algunas ocasiones los dos lados donde el desarrollo toca la cinta pueden no mostrar una lectura defi nida.
Sensidiscos Es muy similar al método de las tiras LE, sólo que se utilizan discos de acetato de celulosa impregnados con diferentes concentraciones de antimicóticos; es sencillo y fácil de realizar, aunque puede presentar el inconveniente de lecturas mal defi nidas y llevar a una interpretación errónea de los puntos de corte para sensibilidad y resistencia.
Azul de Alamar Es similar al método de microdilución en caldo; aquí la lectura se hace de manera visual por los colores rosa (resistente) o azul (sensible) del caldo con el indicador, e inclusive puede conseguirse de manera comercial, aunque este último sólo ofrece dos puntos de corte en la CMI y la resistencia.
Pruebas inmunológicas
Determinación de antígenos: glucoroxilomananos, glucanos y galactomananos La determinación de antígenos en muestras biológicas debe ser interpretada con mucho criterio en el diagnóstico; es importante considerar que las muestras biológicas que pueden dar una reacción positiva a la presencia de los antígenos no necesariamente son indicadas para recuperar hongos viables en los cultivos; en muchas ocasiones, sobre todo si se evalúa la prueba como parte de la respuesta terapéutica, el hallazgo de una reacción positiva puede ser indicativo de fragmentos antigénicos o estructuras micóticas no viables en la muestra biológica; las principales pruebas utilizadas son para el diagnóstico de criptococosis, candidosis y aspergilosis. La determinación de antígeno glucoroxilomanano es la prueba más útil para el diagnóstico de criptococosis; se trata de la determinación antígeno criptococósico (en LCR y otros fl uidos); se hace por aglutinación de partículas de látex revestidas por anticuerpos anticápsula (DACAD). Tiene una sensibilidad muy alta (>90%). Esta prueba también es útil para el monitoreo terapéutico. Los glucanos son componentes esenciales de la pared celular de especies de Aspergillus, Candida y Pneumocystis; el 1-3-β-D-glucano se libera al momento de la infección (exoantígeno); por tanto, su valoración sérica determina una probable infección fúngica como aspergilosis, candidosis y neumocistosis. Los galactomananos son exoantígenos de las diversas especies de Aspergillus; son liberados a nivel sanguíneo y se pueden detectar en diversos fl uidos como suero, orina, LCR y lavado bronquial. Es la prueba más útil para el diagnóstico precoz de aspergilosis pulmonar invasiva y diseminada, así como para seguimiento terapéutico. La técnica más útil es mediante ELISA de doble sándwich en placa (Platelia-Aspergillus®), el cual es un método sensible y altamente reproducible, con efi cacia global entre 83-96%.
Intradermorreacciones La aplicación de antígenos fúngicos de forma intradérmica tiene como fi nalidad evaluar la respuesta inmunológica tipo IV; se usan para fi nes epidemiológicos o para el transcurso de la enfermedad. Los antígenos más utilizados para diagnóstico de micosis son histoplasmina, coccidioidina (preferible la esferulina), paracoccidioidina, esporotricina (micelial para diagnóstico y levaduriforme para epidemiología) y tricofi tina; otro tipo de antígenos extraídos de cultivos de hongos son más usados para evaluar respuestas frente a diversos aeroalergenos (antígenos de Aspergillus niger, Cladosporium cladosporioides, Alternaria alternata, etc.); éstos son más utilizados como cutirreacciones que evalúan inmunidad tipo I (hipersensibilidad).
Fijación de complemento Representa una prueba útil para medir de manera indirecta la presencia de anticuerpos en el paciente en diversos tipos de micosis, principalmente las profundas; son pruebas de evaluación de antígeno-anticuerpo que desencadena el complemento; se pueden hacer mediante varias técnicas inmunológicas; en particular son útiles en enfermedades como coccidioidomicosis e histoplasmosis, donde el valor o titulación del complemento es directamente proporcional al curso de la enfermedad; por tanto, también pueden servir para monitoreo terapéutico.
Inmunodifusión radial (Ouchterlony) Es una reacción clásica de precipitación, en donde la visualización de halos de precipitación de anticuerpos producidos por los pacientes en procesos activos y agudos frente a soluciones de antígenos en un soporte de agar, ayuda a confi rmar la presencia de micosis sistémicas; es importante recordar que dichas pruebas sólo pueden tener validez en pacientes inmunocompetentes, ya que algunos tipos de inmunosupresión humoral pueden dar falsos negativos.
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