Solución acuosa de KOH al 10 y 20% Las muestras de tejidos queratinizados, como escamas de piel, polvo de uñas, pelos y raspado de córnea, deben ser procesadas con la adición de una o dos gotas de solución de KOH al 10% entre portaobjetos y cubreobjetos; la concentración al 10% es la que se prefi ere, aunque se puede aumentar a 20 e incluso 30%, para casos con mayor hiperqueratosis o contenido de fi brina (onicomicosis distrófi cas totales, tiñas hiperqueratósicas, costras melicéricas y hemáticas), así como en lesiones verrugosas (esporotricosis, cromoblastomicosis); en estos casos la degradación de la queratina será más rápida pero se debe tener cuidado, porque también las estructuras micológicas la sufrirán. Una vez realizado el examen en fresco o directo, la preparación se debe calentar suavemente en una fuente directa de calor (mechero, estufa); el objetivo de esto es acelerar la degradación de la queratina y saponifi cación de las grasas; un inconveniente de este procedimiento radica en que la potasa puede cristalizarse y dejar agujas que pueden obstruir la muestra o dar falsos positivos; este efecto se puede minimizar agregando 10% de glicerol, que además evita la evaporación y mantiene la concentración de la solución. Otras sustancias degradantes que se usan para los exámenes directos son el dimetilsulfóxido (DMS) a diversas concentraciones (10-50%), NaOH al 10-20% y ácido láctico al 10-50%. Las soluciones degradantes son útiles también para procesar muestras con alto contenido de mucina (esputo, muestras hemoptoicas); se sugiere también el uso de KOH al 10%, DMS al 20%, N-acetil-L-cisteína-NaOH (a igual volumen) al 3%; la muestra debe posteriormente someterse a centrifugación (3 000 rpm, por 5 minutos), lo que provoca que el exceso de mucina se separe y se puedan realizar más fácilmente los exámenes en fresco.
Negro de clorazol Es un reactivo comercial (Delasco®); contiene como aclarante DMS al 10% y colorante de negro de clorazol; esta solución se utiliza de manera similar al KOH, con la ventaja de que el colorante permite observar mejor las estructuras micóticas (fi lamentos, seudohifas, levaduras y otros), debido a que quedan teñidas con color verde-claro a verde-oscuro; este reactivo es muy útil para uso en consultorio o bien para ojos inexpertos, debido a que hace resaltar más los elementos micóticos.
Azul de Albert y azul de Parker al 10% en KOH al 10% Son reactivos útiles para observar las estructuras parasitarias de Malassezia spp., en los casos de pitiriasis versicolor y dermatitis seborreica asociada a estas levaduras. Las escamas obtenidas en la piel se procesan de manera similar a las que se someten con KOH.
Lugol Este reactivo es la solución yodada que se usa para la tinción de Gram; es útil para observar los granos provenientes de casos de actinomicetomas (Nocardia sp., Actinomadura madurae) y eumicetomas (de granos blancos); se usa para dar contraste a estas estructuras, ya que permite visualizar sus características morfológicas al microscopio, conservándolos por un tiempo corto (minutos); es aconsejable que nunca se procesen en combinación con soluciones fuertemente alcalinas (KOH, NaOH), ya que se degradan rápidamente.
Tinciones Gram Es una tinción útil para seudomicosis superfi ciales como queratólisis punctata, eritrasma, tricomicosis, y profundas, como nocardiosis y botriomicosis. También es de ayuda para
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