Tincion de gram
Gram negativas y positivas utiliza el microscopio optico compuesto se diferencias por oa diferencia de contraste entre el medio de ellas y el medio que los rodea.
Se teñiran con colorantes que aumentan el contraste colorantes organicos cargados positivamente se unen a las cargas negativas de los componentes celulares.
Es la mas utilizada en los laboratorios de microbiologia
Gram positivas
- Membrana cotoplasmatica
- Peptidoglicano
- Fosfolipidos
- Proteina
- Acido lipoteicoico
Gram negativas: tienen una ventana externa
- Membrana citoplasmatica (membrana interna)
- Espacio periplasmatico
- Membrana externa
- Fosfolipidos
- Peptidoglicano
- Lipoproteina
- Proteinas
- Lipolisacaridos
- Porinas
Preparaciones
● Bacteria gram positiva, cultivo encesario
● Mezcla de gram positivas y gram negativas
- Frotis con las bacterias que hay que teñir. Ponemos una gota de agua en el portaobjeto y se hace una extencion de una muestra de un cultivo solido. Dejar secar
- Se fijan con calor. pasar el portaobjetos en la llama del mecherl
- Añadir cristal violeta y dejar actuar 1 min. Y teñir todas las bacterias
- Lavar suavemente con agua
- Añadir lugol y dejar actuar 30 seg. Actua como mordiente fijando el colorante. Lavar con abundamte agua
- Hacer tratamiento con alcohol de 96 ° durante 15 seg. Para producir la decoloracion de las bacterias gram negativas y las gram negativas siguen teñidas de color violeta. Lavar con agua
- Añadir safranina y dejar actuar 1 o 2 min. Para teñir las bacterias gram negativas. Lavar con agua
- Dejar secar la preparacion
- Observar la tincion al microscopio optico com el objetovo de 100X con una gota de aceite de inmersión
Bacterias gram negativas se tiñen de rosa o rojo por la safranina y las gram positivas de violeta por el cristal violeta
Tincion de Z.N
Tecnica que se realiza para bacterias aue se denomina bacilos acido alcohol resistentes dentro de este tipo de bacterias se encuentran
Myvobacterium tuberculosis
Mycobacterium leprae
Nucaa area
Muestra de esputo
Toma una lamina portaobjetos y se marca con un lapiz de cera (se hace un circulo obalado) y al lado contrario se colocará la muestra. ahora con el bajalengua partido a la mitad se toma la muestra y se aplica en el portaobjetos haciendo un pequeño zig-zag a lo largo de este como si se estuviera pintando en portaobjetos y sin dejar espacios.
Esta muestra de deja secar y luego se pasa tres veces por el mechero para que las bacteriad que envian adherencias al portaobjetos en el caso de este video ya tenemos una placa previamente seca que sera la que se va a seguir utilizando.
Se va ha aplicar sobre la muestra de bacterias la faxina de 6 nielsen. La cual puede cubrir toda la lamina. Asimismo se debe flamear con el mechero por espacio de 5 min. Hasta la emision de vapores sin dejar hervir. Solamemte se debe hacer que emita vapores.
Se debe lavar con agua del chorro retirando el exceso de colorante.
Se aplica la muestra de alcohol acido y se deja actuar por 1 min. Luego se vuelve a lavar con agua de chorro y se debe aplicar azul de metileno por 3 min. Despues de este tiempo se lava de nuevo con agua de chorro y se deja secar
Observar al microscopio con 100X con aceite de inmersion
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